胆木药材的指纹图谱研究
1、仪器与试药
Waters 515高效液相色谱仪；国家药典委员会2004年A 版“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”。色谱纯甲醇，试验用水为纯净水，其他试剂均为分析纯。异长春花苷内酰胺对照品（中国药品生物制品检定所，110831-200302）；胆木药材共10批，采自海南五指山地区栽培地不同区域，经中国医科院兴隆分所陈伟平教授鉴定。
2、方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱为Diamonsil TM C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；检测波长为227 nm；柱温为30℃；流动相为甲醇-0.10%磷酸水溶液，二元梯度洗脱，洗脱时间为70 min， 流速为1.0 ml/min；进样量为20 μl，所有组分在70 min内出峰完毕。梯度洗脱条件见表1。
2.4 指纹图谱的建立、分析与评价
2.4.1 指纹图谱的建立
按照供试品溶液制备方法将10批药材制备成供试品溶液，分别进样检测，测定所有供试品溶液的HPLC色谱图。根据10批次供试品测定结果所给出的`峰数、峰值（积分值）和相对保留时间等相关参数，进行分析、比较，制定优化的指纹图谱。见图1。
2.4.2 共有峰确定
根据10批胆木供试品的检测结果，比较色谱图。选择胆木供试液图谱中峰面积较大、峰形较好的色谱峰作为共有峰，共8个（见图2），其中7号峰为异长春花苷内酰胺（为胆木药材主要成分），其峰面积约占总峰面积70%，峰形稳定，可将该峰作为参照峰。
2.4.3 共有峰相关信息
根据10批胆木样品的色谱图结果，以7号峰作为参照峰，计算各共有峰相对保留时间，结果RSD<2.0%（见表2）。8个共有峰其峰面积总和占总峰面积平均百分比为93%。以参照峰峰面积为基准，计算各共有峰峰面积与参照峰峰面积的比值，共有峰面积比值基本固定。结果见表3。均符合指纹图谱的要求。表2 共有峰相对保留时间（略）表3 共有峰的峰面积与参照峰面积比值（略）
2.4.4 指纹图谱相似度评价
本实验记录了10批海南五指山地区不同区域胆木药材的指纹图谱（见图3）。将测试数据导入国家药典委员会2004年A 版“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”进行数据处理。得到胆木药材指纹峰共有模式R（见图3）；与共有模式比较，10批海南五指山地区不同区域胆木药材的指纹图谱相似度分别为0.994，0.995，0.996，0.995，0.994，0.982，0.990，0.989，0.996，0.998。 检测波长的确定在对供试品溶液进行HPLC分析的同时，对紫外检测波长进行了筛选，发现在227 nm处胆木药材各色谱峰分离度较好，且主要活性成分异长春花苷内酰胺有较强的吸收，故选择227 nm作为指纹图谱的检测波长。