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检验技师考点：纯化抗体
纯化抗体通常用于直接检测抗原。此时抗体标记有一个易于鉴定的标记物，用于结合和检测所研究的抗原。在间接检测抗原方法中，一抗不被标记，而是用标记的二抗(一种抗免疫球蛋白抗体)来检测。一般而言，建议使用间接法。因为许多商家能够提供可靠的标记二抗，用间接法不仅省力，结果同样可靠。 尽管如此，有几种方法需要标记的一级抗体。例如，在免疫染色试验中，需要研究2个或2个以上抗原的相对位置时，常需要纯化抗体并用不同标记物标记，这样能比较它们的相对位置。此时使用间接法不合适。因为间接法是用标记二抗来给未标记的一抗定位。又如，有时一抗需要标记，而该样本中又有大量无关抗体，它们能干扰对一抗的检测，此时用间接法也不合适。用鼠源性单抗对鼠组织抗原进行定位时，也会出现这种情况。此时需要纯化一抗，并直接按下述方法进行标记。
简介：
制备高特异性、高效价的抗体是实验免疫学技术的基础，抗体质量的高低将直接影响试验的成败。 通过不同方法制备的抗体往往与多种杂蛋白混杂在一起，为了获得成分相对单一的抗体或将抗体用于特定的用途，就需要进行抗体纯化。从成分的角度分析, 抗体分子是一类蛋白质分子，与其他蛋白质一样，它有一定的等电点、溶解度、荷电性及疏水性，可以用电泳、 盐析沉淀或其他层析技术进行分离、 纯化。
纯化抗体通常用于直接检测抗原。此时抗体标记有一个易于鉴定的标记物，用于结合和检测所研究的抗原。在间接检测抗原方法中，一抗不被标记，而是用标记的二抗(一种抗免疫球蛋白抗体)来检测。一般而言，建议使用间接法。因为许多商家能够提供可靠的标记二抗，用间接法不仅省力，结果同样可靠。 尽管如此，有几种方法需要标记的一级抗体。例如，在免疫染色试验中，需要研究2个或2个以上抗原的相对位置时，常需要纯化抗体并用不同标记物标记，这样能比较它们的相对位置。此时使用间接法不合适。因为间接法是用标记二抗来给未标记的一抗定位。又如，有时一抗需要标记，而该样本中又有大量无关抗体，它们能干扰对一抗的检测，此时用间接法也不合适。用鼠源性单抗对鼠组织抗原进行定位时，也会出现这种情况。此时需要纯化一抗，并直接按下述方法进行标记。
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