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微生物检验标本的正确采集及注意事项
正确采集临床微生物标本，直接影响到微生物培养鉴定结果。可靠的检验结果可以指导临床诊断治疗，为临床科学用药和成功的感染控制提供依据，是正确、合理使用抗菌药物，延缓细菌耐药，减少抗菌药物滥用和监测医院感染的第一步，也是最重要的一步。下面是小编为大家带来的微生物检验标本的正确采集及注意事项的知识，欢迎阅读。
一、 血液标本的采集
比以10：1为宜，以稀释血液中的抗生素，抗体等杀菌物质;有人主张对接受抗菌药物治疗的病人，培养基与采血量之比可为20：1或大于这个比例。
（4）近年研究表明，将血液注入血培养基前，更换针头反而易导致污染。
（5）每例至少采血两次，间隔0.5—1h，以利于提高阳性率和区分感染菌与污染菌。
（6）疑为细菌性心内膜炎及布鲁氏病的病人，以肘动脉或股动脉采血为宜，除在发热期采血外，并要多次采血（24h 3—4次）和增加采血量（可增加10ml）。
（7）采血后立即送检，如不能立即送检可置室温，而不能放置冰箱。
（8）如临床表现很似败血症，而血培养多次阴性者，提示考虑厌氧菌和真菌感染的可能。
二、骨髓的采集
1、采集方法
在病灶部位或上脊处严格消毒后抽取骨髓1ml，注入血培养瓶内。
2、注意事项
（1）骨髓内含有大量的单核巨噬细胞系统的细胞，因而骨髓培养对伤寒病人的诊断较血培养优越。
（2）用于怀疑细菌性骨髓炎病人。
三、静脉导管标本的采集
1、采集方法
（1）常规导管部位皮肤消毒。
（2）无菌方法从病人体内拔出静脉导管，剪下导管尖端5cm，放入无菌瓶中。
（3）立即（15min内）送检，避免标本干燥。
2、注意事项
（1）剪下的导管立即接种血平皿，可提高阳性率。
（2）肉汤反复冲洗导管腔内，冲洗液做定量培养。
（3）有人将剪下的导管置肉汤增菌液或培养瓶中，此法不能区分导管感染菌与少量定植菌。
（4）卫生部在《医学感染诊断标准》（试行）（2001年1月3日施行）中规定：导管管尖培养其接种方法应取导管尖端5cm，在血平板表面往返滚动一次。细菌≥15cfu/平板，即为阳性。
四、呼吸道
1、痰标本
（1）采集方法
①清晨起床后用凉开水漱口多次，以除去口腔内大量杂菌，用力咳出肺深部的脓痰，置于清洁干燥容器中送检。
②痰量极少者可用45℃ 3%—10%的氯化钠溶液约25ml雾化。对于咯痰量少的幼儿，可轻轻压迫胸骨上部的气管，当其咯痰后用无菌棉棒采集标本。
③咳嗽无力或昏迷病人，可用吸痰管经鼻腔或口腔经气管腔内吸引痰液送检。
④气管切开者可以深入透气孔中取痰。
⑤可用支气管镜直接在病灶部位采集高浓度的病原菌。
⑥用无菌导管经鼻腔插入气管镜内，缓慢注入无菌蒸馏水5ml，取出导管。留取患者在3h内咳出的痰液，放入无菌容器中送检。
⑦胃内采痰法。无自觉症状的结核病人。有时可把痰误咽入胃内，因而可采用胃内溶物做结核菌培养，其阳性结果比咯痰高10%左右，该方法于晨起空腹时，把灭菌的胃管，从鼻腔送入胃内，用20ml注射器抽取胃液。
（2）注意事项
①痰标本的采集以晨痰为准，此时患者痰量较多且含菌量也多。
②标本采集后立即送检，若不能及时送检者，可暂存2—8℃冰箱。若晚1—2h接种，会失去苛氧菌，并使得革兰阴性菌过分生长。
③可接受的标本：痰;支气管灌洗液，支气管刷，支气管活检;肺吸出物和肺活检。不能接受的标本：唾液;24h留的痰（结核杆菌培养除外）;拭子。
④ 痰标本的质量评价：（用显微镜筛选）在低倍镜下，检查鳞状上皮细胞，至少10个视野，集中在有白细胞处，合格标本为白细胞与鳞状上皮细胞比例大于2：1。
2、鼻拭子
（1）用湿的拭子（生理盐水）;
（2）需插两个鼻孔;
（3）深入3.3cm左右，转动4—5次;
（4）以上用于诊断金黄色葡萄球菌暴发时的鼻带菌者。
3、咽拭子、口腔拭子
（1）采集方法（到细菌室取专用拭子）
①患者清水漱口后，由检查者将其舌外拉，用棉拭子将咽后壁或悬雍垂的后侧反复擦拭数次;
②化脓性扁桃体炎、口腔念珠菌病时，直接用棉拭子在病灶部位擦拭;
③插入运送培养基中立即送检，防止干燥。
（2）注意事项
①棉拭子应避免触及舌、口腔黏膜和唾液;
②采集标本前数小时不可用消毒药物漱口或接触病灶局部。
五、胃肠道
1、粪便
（1）采集方法
选取脓血、黏液粪便2—3g，液体粪便取絮状物1—2ml。盛于灭菌瓶中或蜡纸盒中及时送检。
（2）注意事项
①标本要采集新鲜的，陈旧标本影响阳性检出率;
②切忌粪尿混合;
③若要分离阿米巴，标本要立即送检并注意保温;
④运送培养基可提高阳性率;
⑤分离难辨梭菌时需选不成形或水样便;
⑥霍乱弧菌、大肠杆菌Ο157感染的腹泻便则为水样便或血性便;
⑦标本在病理早期或治疗前采集;
⑧一般认为用抗菌药三天后，标本培养病原菌阴性。
2、肛拭子
在无法获得粪便的情况下，可用经无菌甘油水或无菌生理盐水湿润的肛拭子插入肛门4—5cm（幼儿2—3cm）处，轻轻旋转擦取直肠表面黏液后取出，置运送培养基中送检。
六、泌尿道
根据卫生部《医学感染诊断标准》（试行）通知，泌尿系统临床诊断为：患者出现尿频、尿急、尿痛等尿路刺激症状，或有下腹触痛、肾区叩痛、伴或不伴发热，并具有下列情况之一：
（1）尿检白细胞男性≥5个/高倍视野，女性≥10个/高倍视野，插导尿管患者应结合尿培养;
（2）临床已诊断为泌尿道感染，或抗菌治疗有效而认定的泌尿道感染。
1、中段尿
（1）采集方法
①女性 采样前用肥皂水或0.1%的高锰酸钾溶液冲洗外阴，用手指阴x分开排尿，弃其前段尿，不终止排尿，留取中段尿10ml于灭菌容器内。
②男性 用肥皂水清洗尿道口，或0.1%的碘伏溶液消毒尿道口，灭菌纱布擦干，上翻包皮，弃其前段尿，不终止排尿，留取中段尿10ml于灭菌容器内。
（2）注意事项
①导尿虽然可以减少污染，但是多次重复导尿可以造成逆行性感染，因此近年来大多采用中段尿。
②女性病人最好采取膀胱截石位由护士采取标本，减少污染。
③采集标本以晨起第一次尿液为佳。
④采集标本后，若不能在1h内送检，暂放4℃冰箱，但不能超过8h。若尿液标本在室温下放置超过2h，即使接种培养结果细菌数≥104 cfu/ml获103cfu/ml，也不能作为诊断依据，应重新留取标本送检。
⑤疑为尿道炎时可将最初3—4ml尿液收集在灭菌容器内。该尿中即使有少数细菌，如反复检查为同一细菌，也应考虑为病原菌。
⑥儿童在多数情况下，仅冲洗外阴是不够的，故采集标本较为困难。如果尿内细菌明显增多，可以高度怀疑为尿路感染，无菌则可否定。
⑦若细菌培养结果为两种或两种以上细菌，需考虑污染可能，建议重新留取标本送检。
⑧尿液中不得加入防腐剂，消毒剂否则影响阳性检出率。
2、膀胱穿刺采集法
避免污染是很困难的，培养结果与病情不符时，或尿厌氧菌培养，或婴幼儿中段尿采集困难时，可以用耻骨上穿刺膀胱内采尿。
3、留置导尿者采集法
拔去闭式引流的集尿袋，弃去导尿管前段尿液，留无污染的膀胱内尿液10ml送检。不可从集尿袋下端留取标本。
七、脑脊液
1、采集方法
由临床医师以无菌方法收集脑脊液3—5ml（细菌1ml，真菌2ml抗酸杆菌2ml，病毒1ml）盛于无菌试管或小瓶中立即送检。
2、注意事项
（1）采集标本后立即送检，因脑膜炎奈瑟菌离体后迅速自溶，肺炎链球菌及流感嗜血杆菌也易死亡;
（2）疑为上述细菌感染时，应注意保温，不可置冰箱或低温保存。
八、胆汁
1、十二指肠引流法
在无菌操作下，将十二指肠导管吞咽至十二指肠乳头部（距齿65—70cm）时，收集A液（来自总胆管，为橙黄或金黄色），随之注入25%硫酸镁溶液40ml，经1—2min后再采取B液（来自胆囊，为棕黄绿色），随后收取C液（来自肝胆管，为柠檬色），一般认为B液做细菌培养意义较大。
2、胆囊穿刺法
胆囊造影术时，可同时采取胆汁。
3、手术采取法
由总胆管、胆囊直接穿刺采取胆汁。
以上采集之标本应立即送检，否则置于4℃冰箱内，采集时需小心，避免被唾液、十二指肠液细菌污染。
九、穿刺液标本
穿刺液包括胸水、腹水、心包液、关节液、鞘膜液。
1、采集方法
由临床医师行穿刺术抽取。胸腹水可收集5—10ml，心包液、关节液收集2—5ml，置于无菌含抗凝剂的试管或小瓶中，充分混匀后，立即送检。抗凝剂10%EDTA二钠盐，标本与抗凝剂之比10：1。
2、注意事项
⑴标本采集应在患者用药之前或停止用药1—2天后进行;
⑵不能立即送检可置4℃冰箱保存;
⑶疑为淋病性关节炎患者的关节液，采集后立即送检，或床旁培养为佳;
⑷不能用棉拭子浸蘸标本送检。
十、脓汁及病灶分泌物
1、伤口
⑴表面伤口拭子采集方法及注意事项
① 仅限于皮肤与皮下组织，包括手术切口、褥疮溃疡、新生儿脐炎、婴儿脓疮病。
②用无菌生理盐水或75%的酒精擦去病灶表面渗液;
③用无菌棉拭子抹去及较深部的脓汁分泌物或组织送检;
④采集褥疮溃疡标本时应采集褥疮边缘的脓性分泌物，拭子放在运送培养基中立即送检，不要采集创口表面的渗液。
⑵伤口、脓肿、窦道、坏疽组织采集方法及注意事项
①闭锁性脓肿用碘酒和酒精消毒皮肤后，用灭菌注射器穿刺抽取全部脓液送检，疑为厌氧菌感染时，排去针管内空气将针头插入灭菌橡胶塞内送检;
②伤口处若有脓及渗出物要用无菌棉签深入各种窦道中擦拭，用小刀刮取，穿刺抽吸或手术切除获得深处伤口标本;
③当创伤出血时，敷有药物在2h以内及烧伤在12h内均不应采集标本，此时获得阳性结果机会甚少。
④采集标本注意观察脓汁及分泌物性状、色泽、气味等。可为培养鉴定提供依据。
⑶烧伤创面
①烧伤创面需要脓性分泌物，焦痂迅速分离变棕黑、黑或紫罗兰色，烧伤边缘水肿。患者发烧>38℃或低体温<36℃，合并低血压。
②用无菌生理盐水冲洗伤口创面。
③由于创面部位不同，细菌种类也不尽相同，要用灭菌棉拭子采集多个部位的炎症区送检。
④采集痂下变黑或变性的不健康区边缘或引流液等做定量培养及组织活检。
2、厌氧伤口拭子
⑴厌氧专用棉棒或玻璃棒触及深部脓汁;
⑵可用注射器抽吸，排去针管内空气将针头插入灭菌橡胶塞内送检;
⑶立即送检，送检过程中必须保持在无氧条件;
⑷不宜做厌氧菌培养的有痰、喉拭子、鼻咽拭子、齿龈拭子、直肠、阴道和宫颈拭子以及回肠、结肠造瘘术的流出物，胃、小肠及大肠内容物等。
3、尿道口分泌物拭子
⑴男性用无菌纱布擦拭和清洗尿道口，然后采取从尿道口溢出的脓性分泌物;
⑵采集前列腺液时，先将尿道、膀胱冲洗，然后从肛门用手指按摩前列腺，促使前列腺液溢出;
⑶女性病人先用灭菌纱布或棉拭子仔细擦拭或清洗尿道口，然后从阴道内诊压迫尿道，使分泌物溢出;
⑷取子宫颈分泌物，先用内窥镜扩张阴道，然后从宫颈口用灭菌棉拭子采取分泌物，尽量避免被阴道宫颈附近正常菌群的污染。
4、蜂窝织炎
⑴用无菌生理盐水或酒精消毒皮肤;
⑵用细针在炎症最显著处穿刺吸引;
⑶抽少量灭菌生理盐水在针管内;
⑷注入无菌试管内送检。
5、组织标本
⑴活体组织采取的微量标本，可直接接种在培养基内;
⑵表浅组织可直接用棉拭子擦拭、小刀刮去;
⑶较大组织块的表面可采用烧灼或浸入沸水中5—10s，然后用灭菌剪刀切开，取其中的脓汁;
⑷深部组织标本可经皮肤穿刺或手术切取送检;
⑸组织标本不可用福尔马x固定;
⑹有时也可将沾有脓汁的最内层敷料放入无菌平皿内送检。
十一、眼标本采集
⑴一般细菌，以无菌棉拭子采集眼分泌物，尤其脓性分泌物;
⑵沙眼衣原体，首先擦去眼结膜上面的分泌物，然后用无菌小刀刮取穹窿部及眼结膜上皮细胞，用链霉素处理后备用;
⑶对于刚治疗或药物冲洗过的患者最好12—24h后采集标本;
⑷对于泪囊炎患者可稍加挤压后以无菌棉拭子采集标本。
医学检验标本的采集原则
一、病人准备
1.病人状态
一般需在安静状态下采集标本，如患者处于高度紧张的状态时，可使血红蛋白、白细胞增高。由于劳累或受冷等刺激、也可见白细胞的增高。运动能影响许多项目的测定结果。活动的影响可分暂时和持续性两类。暂时性影响如使血浆脂肪酸含量减少;丙氨酸、乳酸含量增高。持续性影响，如激烈运动后使CK、LDH、ALT、AST和GLU等的测定值升高，有些恢复较慢，如ALT在停止运动1h后测定，其值仍可偏高30%～50%。
2.饮食
多数试验要求在采血前禁食12h，因为饮食中的不同成分可直接影响实验结果。
(1) 餐后血液中TG、ALT、GLU、BUN、Na等均可升高，进食高蛋白或高核酸食物，可以引起血中的尿素氮(BUN)和尿酸(UA)的增高。进食高脂肪食物后采集的血液样本，其血清会出现浑浊，可影响许多检验测定的正确性。甚至喝含咖啡的饮料，可引起淀粉酶(AMS)、AST谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)等升高。但空腹时间过长，会使GLU，蛋白质降低，而胆红素升高。
(2) 高脂餐后2～4h采血，多数人ALP含量增高，主要来自肠源性同工酶，且与血型有密切关系，O型或B型兼为Le+分泌型者增高更为明显。
(3) 高蛋白质饮食可使血浆尿素、血氨增加，但不影响肌酐含量。
(4) 高比例不饱脂肪酸食物，可减低胆固醇含量;香蕉、菠萝、番茄可使尿液5-羟色胺增加数倍。
(5) 含咖啡因饮料，可使血浆游离脂肪酸增加，并使肾上腺和脑组织释放儿茶酚胺。食物如含有动物血液，可引起粪隐血假阳性。
(7) 饮酒后使血浆乳酸、尿酸盐、乙醛、乙酸等增加，长期饮酒者高密度脂蛋白胆固醇偏高、平均血细胞体积增加、谷氨酰转肽酶亦较不饮酒的病人为高，甚至可以将这三项作为嗜酒者的筛选检查。
吸烟：瘾大者血液一氧化碳血红蛋白含量可达8%，而不吸烟者含量在1%以下。此外，儿茶酚胺、血清可的松亦较不吸烟者为高，血液学方面亦有变化，白细胞数增加、嗜酸粒细胞减少、中性粒细胞及单核细胞增多、血红蛋白偏高、平均红细胞体积偏高。吸烟组血浆硫氰酸盐浓度明显高于非吸烟组。
3.药物
药物对检验的影响非常复杂，在采样检查之前，以暂停各种药物为宜，如某种药物不可停用，则应了解可能对检验结果产生的影响。庆大霉素、氨芐青霉素可使谷丙转氨酶活性增高、咖啡因可使胆红素增加、维生素C可使血糖、胆固醇、甘油三脂、尿酸严重降低。
4.体位
体位影响血液循环，由于血液和组织间液因体位不同而平衡改变，则细胞成分和大分子物质的改变较为明显，例如由卧位改为站位，血浆ALB、TP、酶、Ca、胆红素、Tch及TG等浓度增高;Hb、HCT、RBC等亦可增加。由于体位的因素，在确立参考值时，应考虑门诊和住院病人可能存在的结果差异，故采集标本时要注意保持正确的体位和保持体位的一致性。
5.时间
病人准备还应考虑病人的生物钟规律，特别是激素水平分析，如女性生殖激素与月经周期密切相关;胆固醇则在经前期最高，排卵时最低;纤维蛋白原在经前期最高，血浆蛋白则在排卵时减少。生长激素于入睡后会出现短时高峰。胆红素、血清铁以清晨最高;血浆蛋白在夜间降低;血Ca往往在中午出现最低值。故采血时间应在相同时间进行。
二、标本采集
标本采集是直接关系检验结果的基本要素，如果标本采集不当，即使最好的仪器设备也难以弥补在采集标本时引入的误差和错误。
现将各种标本的采集要点分述如下：
(一) 血液标本
1.标本采集注意事项：
(1) 采静脉血时止血带结扎过久，可引起误差。如以结扎1min的样品结果为基数，则结扎3min，可使血浆总蛋白增加5%，胆固醇增加5%，铁增加6%，胆红素增加8%，乳酸则不能使用止血带。
(2) 血清标本应避免溶血。许多物质红细胞内和血清中(血浆)的含量是不一样的。如ALT红细胞内比血清高出数倍。血钾、AST高出几十倍，而HDH则高出百倍以上，一旦溶血，特别是严重溶血，造成血清(浆)中这些物质的测定值增高，干扰测定结果。
(3) 要特别注意采血不能在输液的同侧进行，更应杜绝在输液管内采血，因输液成分会影响检测结果(使相应的结果偏高，如输K+、Glu时，可使所测K+、Glu明显增高)，或使血液稀释结果偏低。
细胞培养的样品要采用无菌技术，防止污染。
(4) 标本采集后，必须在试管或容器上帖上检验申请单号码、住院病人应有床号、姓名，且应当场核对无误。
(5) 采血顺序
推荐采用直针采血方式，顺序如下：
①血培养管，
②凝血项目管(蓝帽)，
③血沉管(黑帽)，
④血清管(红帽或黄帽)，
⑤肝素血浆管(绿帽)，
⑥EDTA 管(紫帽)，
⑦ 抑制血糖酵解管(灰帽)。
必须指出的是，各种标本都必须严格贴好标签。
(二) 尿液标本
根据采集时间可分为清晨空腹尿、随机尿、计时尿(2h、3h、12h、24h等)、午后尿、餐后尿、症状典型时尿等。
(1) 晨尿为住院病人留尿的主要方法，早晨起床后收集第一次尿，可用尿常规检验。
(2) 随机尿多为门诊就诊病人的留尿检验方法。
(3) 餐后尿为收集进餐后2h尿，主要用于了解葡萄糖代谢情况，用以筛查隐性糖尿病或轻症糖尿病。
(4) 计时尿应于计时开始时排空尿液，然后于规定时间内至截止时间留尿，计时尿多用于肾功能和有形成分排出率的评估，亦用于计算淀粉酶或肌酐的排出率。
(三) 粪便标本
采集后及时送检，如作原虫阿米巴检查应保持一定的温度，且立即送检，立即检查，如检查蛲虫则不必送检粪样，而应于晨起时排便前用棉拭擦肛门周围，可得虫卵。粪便标本应不污染容器外表，一般以无滤漏容器留取5～10g即可。
(四) 脑脊液、浆膜腔液、关节液
均由临床医师穿刺采样，检验科应提供专用的各种试管或容器，及时送送检。
(五) 痰液标本
采集晨间第一口痰，多用于细胞学及微生物学检查。采样前应先反复漱口，经深呼吸数次后用力咳痰，不可吐入唾液。微生物培养取样应在抗生素等药物治疗开始之前，如已使用用抗菌药物，则应选血液药物浓度最低水平时采样。
(六) 阴道分泌物
由妇产科医师采样后即时送检，否则影响滴虫动力，易于漏检。
(七) 其他标本
根据具体检验项目而定，临床医师在开申请单前，应同检验科相关部门联系并询问详细后，注明检查要求，再采样并及时送检。
总之，各种检验标本的采集合适与否，直接关系检验质量，应予以重视。
三、标本保存和运送
标本保存和运送是检验质量保证的重要环节之一。由于采集的标本受各种因素的影响，可能使检验结果受或大或小的误差，因此必须正确掌握标本保存和运送。标本采集后尽量立即送检，如在室温放置时间过长会造成血液成分的变化(如血糖及酶活性降低)，也可造成溶血现象。
(1) 采样后须立即送检的常规项目：血氨、血沉、血气分析、酸性磷酸酶、乳酸以及各种细菌培养，特别是厌氧菌培养。
(2) 采样后0.5h内送检的常规项目：血糖、电解质、血液细胞学、凝血试验、体液细胞学、涂片找细菌、霉菌等。
(3) 采样后1～2 h内送检的常规项目：各种蛋白质类、色素类、激素类、脂类、酶类、抗原、抗体测定等。
医学检验知识
一些干扰物质可对尿液的检测造成一些不利的影响，如不进行避免会对临床检验工作带来不良的后果。例如：青霉素、右旋糖酐、碘造影剂会造成尿蛋白磺柳酸法出现假阴性的现象;链霉素、Vc、异烟肼、先锋Ⅰ等物质会造成用还原法进行尿糖检验时出现假阴性的结果。而且大量的Vc会抑制隐血实验的正常进行。所以，在检验工作中，如需用到以上物质，要特别注意对尿液的检测结果做出正确的分析与总结，切忌盲目下结论。
粪便标本的留取：
留取时间的要求：
大多检验对标本留取前的饮食没有太大的要求，但在进行便潜血检验时必须要求患者三天之内不得使用新鲜的动物食品，并且在留取过程中要尽可能地去避免铜与铁对标本的污染，若被铜于铁污染后进行检测会引起假阴性结果的出现，干扰检验的进行。而且，在服用大量K1以及Vc以后也会引起假阴性结果的出现[2]。
送检时间的要求：
粪便标本与尿液标本一样，在留取后应立即送往接受检验，切不可污染有尿液或是一些其他的污水杂质，若标本被污染，则病原性原虫的滋养体就会迅速的死亡，自然界中非致病性原虫就会混入到标本之中，对结果产生影响。此外，许多细胞成分会在PH值以及肠蛋白酶的影响下迅速的溶解，造成细胞的提前衰亡，致使再利用触酶法进行潜血试验时实验的灵敏度会有所下降。
脑脊髓液(CSF)的留取：
在对脑脊髓标本进行留取时要有检验医师进行留取操作，一般情况下，整个留取过程应分为四个阶段进行，在最开始因为一管中大多存在有血液的成分混在其中，所以该部分一般不用于一些常规项目的检查，第二管和第三管分别可以用于一些细胞成分和化学成分的检测，而等到第四管则可以用来做手术医生观测网膜形成情况的重要依据[3]。因为脑脊髓液的采取十分的困难，采取的量又很少，所以脑髓也的标本对中枢疾病的诊断来说具有十分重大的意义，所以，脑髓液标本在采取后应该立即送往进行检测，并且，检验操作要迅速，尽可能防止各种有效成分由于时间的延长而发生不可逆的改变，从而对检验结果产生不良的影响。