2017年卫生资格检验技师精华考点
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尿液化学成分检查项目之一
尿液蛋白为尿液化学成分检查中最重要的项目之一。正常人的肾小球滤液中存在小分子量的蛋质，在双月刊牢牢曲小管时绝大部分又被重吸收，因此终尿中的蛋白质含量很少，仅为30-130mg/24h.随机一次尿中蛋白质为0.80mg/L.尿蛋折定性试验呈阴性反应。
当尿液中蛋白质超过正常范围时称为蛋白尿，含量大于0.1g/L时定试验可阳性。正常时分子量在7万以上的蛋白质不能通过肾小球滤过膜，而分子量1-3万的低分子蛋白质虽大多可通过滤过膜，但又为近曲小管重吸收，由于肾小管细胞分泌的蛋白如TammHorsfall蛋白(T-H蛋白)、SigA等以及下尿路分泌的粘液蛋白可进入尿中。
尿蛋白质 2/3来自血浆蛋白，其中白蛋白约占40%其余为小分子量的酶(溶菌酶等、)肽类、激素类先进，如将正常人尿液浓缩后再经免疫电泳，可按蛋白质的分子量量大小分成以下3组：
①高分子量蛋白质：分子量大于9万，含量极微，包括由肾髓袢升支极及远曲小管上皮细胞分泌的T-H糖蛋白及分泌型IGA等;
②中分子量蛋白质：分子量4-9万，是以白蛋白为主的血浆蛋白，可占尿蛋月总数的1/2-2/3;③低分子量蛋白质：分子量小于4万，绝大多数已在肾小管重吸收。因此尿中含量极少，如免疫球蛋白FC片段，游离轻链、α1微球蛋白、β2微球蛋白等。
荧光色素
许多物质都可产生荧光现象，但并非都可用作荧光色素。只有那些能产生明显的荧光并能作为染料使用的有机化合物才能称为免疫荧光色素或荧光染料。常用的荧光色素有：
1.异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate，FITC)为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水或酒精等溶剂。分子量为 389.4，最大吸收光波长为490——495nm，最大发射光波长520——530nm，呈现明亮的黄绿色荧光，结构式如下：有两种同分异结构，其中异构体Ⅰ型在效率、稳定性、与蛋白质结合能力等方面都更好，在冷暗干燥处可保存多年，是应用最广泛的荧光素。其主要优点是：①人眼对黄绿色较为敏感，②通常切片标本中的绿色荧光少于红色。
2.四乙基罗丹明(rhodamine，RIB200)为橘红色粉末，不溶于水，易溶于酒精和丙酮。性质稳定，可长期保存。结构式如下：最大吸收光波长为570nm，最大发射光波长为595～600nm，呈橘红色荧光。
3.四甲基异硫氰酸罗丹明(tetramethylrhodamineisothiocyanate，TRITC)结构式如下：最大吸引光波长为 550nm，最大发射光波长为620nm，呈橙红色荧光。与FITC的翠绿色荧光对比鲜明，可配合用于双重标记或对比染色。其异硫氰基可与蛋白质结合，但荧光效率较低。
免疫荧光原理
免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性，所以当抗原抗体发生反应时，只要知道其中的一个因素，就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上，与其相应的抗原(或抗体)结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。
直接法：将标记的特异性荧光抗体，直接加在抗原标本上，经一定的温度和时间的染色，用水洗去未参加反应的多余荧光抗体，室温下干燥后封片、镜检。
间接法：如检查未知抗原，先用已知未标记的特异抗体(第一抗体)与抗原标本进行反应，用水洗去未反应的抗体，再用标记的抗抗体(第二抗体)与抗原标本反应，使之形成抗原—抗体—抗体复合物，再用水洗去未反应的标记抗体，干燥、封片后镜检。如果检查未知抗体，则表明抗原标本是已知的，待检血清为第一抗体，其它步骤的抗原检查相同。
标记的抗抗体是抗球蛋白抗体，同于血清球蛋白有种的特异性，如免疫抗鸡血清球蛋白只对鸡的球蛋白发生反应，因此，制备标记抗体适用于鸡任何抗原的诊断。
免疫荧光技术特点
该技术的主要特点是：特异性强、敏感性高、速度快。主要缺点是：非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，技术程序也还比较复杂。
荧光免疫法按反应体系及定量方法不同，还可进一步分做若干种。与放射免疫法相比，荧光免疫法无放射性污染，并且大多操作简便，便于推广。国外生产的TDM用试剂盒，有相当一部分即属于此类，并且还有专供TDM荧光偏振免疫分析用的自动分析仪生产。
由于一般荧光测定中的本底较高等问题，荧光免疫技术用于定量测定有一定困难。新发展了几种特殊的荧光免疫测定，与酶免疫测定和放射免疫分析一样，在临床检验中应用。
抗原抗体反应
将抗原(标准品和受检标本)、标记抗原和抗血清按顺序定量加入小试管中，在一定的温度下进行反应一定时间，使竞争抑制反应达到平衡。不同质量的抗体和不同含量的抗原对温育的温度和时间有不同的要求。
如受检标本抗原含量较高，抗血清的亲和常数较大，可选择较高的温度(15～37℃)进行较短时间的温育，反之应在低温(4℃)作较长时间的温育，形成的抗原抗体复合物较为牢固。
抗血清的检定
含有特异性抗体的抗血清是放射免疫分析的主要试剂，常以抗原免疫小动物诱发产生多克隆抗体而得。抗血清的质量直接影响分析的灵敏度和特异性。抗血清质量的指标主要有亲和常数、交叉反应率和滴度。
1.亲和常数亲和常数(affinityconstant)常用K值表示。它反映抗体与相应抗原的结合能力。K值的单位为mol/L，即表示 1mol抗体稀释至若干L溶液中时，与相应的抗原结合率达到50%.抗血清K值越大，放射免疫分析的灵敏度、精密和准确度越佳。抗血清的K值达到 109～1012mol/L才适合用于放射免疫分析。
2.交叉反应率放射免疫分析测定的物质有些具有极为类似的结构，例如甲状腺素的T3、T4，雌激素中的雌二醇、雌三醇等。针对一种抗原的抗血清往往对于其类似物会发生交叉反应。
因此交叉反应率反映抗血清的特异性，交叉反应率过大将影响分析方法的准确性。交叉反应率的测定方法为用与抗血清相应抗原及其类似物用同法进行测定，观察置换零标准管50%时的量。以T3抗血清为例，置换零标准50%T3为1ng，其类似物T4则需 200ng，则其交叉反应率为：1/200=0.5%.
3.滴度滴度系指将血清稀释时能与抗原发生反应的最高稀释度。它反映抗血清中有效抗体的浓度。在放射免疫分析中滴度为在无受检抗原存在时，结合50%标记抗原时抗血清的稀释度。
胃粘液|碳酸氢盐
1.粘液(mucus)胃粘膜以常处于与胃液接触中，而只有食物被消化，胃组织不受损伤，其部分原因是因为覆盖于全胃表面的一层胶状粘液的保护作用。这种胶状物形成一种粘液屏障与胃粘膜屏障不同，保护胃沾膜免受酸、胃蛋白酶及其它的害物质侵蚀。这还人滑润作用，使胃粘膜不受机械性损伤。粘液不能阻挡水和电解质的通透。在基础状况下对胃酸有一定的中和作用，但在刺激后胃酸分泌时，此时作用微不足道。
2.碳酸氢盐：是覆盖于胃表面的粘液一碳酸氢盐屏障，对粘膜起保护作用，这个屏障作为含有PH梯度的胶状物为上皮表面提供了一处中性微环境。碳酸氢盐由胃表面粘液细胞所分泌。
胃液中盐酸
胃液中盐酸以解离的游离酸与结合的结合酸两种形式在，两者加在一起为交响曲盐酯。此外胃液中还有极少的可以忽略不计的其它酸性物质，如有机酸乳酸、乙酸等及酸性盐酸性磷酸盐。这些酸总和起来以总酸度表示，但目前多以总盐酸分泌量表示胃液酸排出量。
盐酸的主要消化功能是胃蛋白酶原的激活提供所必须的高度酸化条件，同时也能有限地水解少许多肽和多糖。胃酸还杀死食入细菌的能力，此钱盐酸进入小肠后可以促进胰液、肠液和胆汁的的分泌促进对钙和铁等物质的吸收。胃液过多或过少均可出现许多症状，或成为疾病的原因之一。测定胃盐酸分泌量是常用的测量胃分泌功能的试验。
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