临床检验技师临床免疫学知识：酶

2017年临床检验技师临床免疫学知识：酶

　　导语：酶指具有生物催化功能的高分子物质， 在酶的催化反应体系中，反应物分子被称为底物，底物通过酶的催化转化为另一种分子。常见的酶有哪些?一起来看看吧。

　　1常用的酶：

　　1.辣根过氧化物酶(HRP)，应用最广泛，强酸是其强烈抑制剂，采用硫酸作为反应终止剂。避免使用叠氮钠作为酶标复合物的防腐剂。

　　2.碱性磷酸酶(ALP)，含磷酸盐的缓冲液对酶具有抑制作用，不能用磷酸盐缓冲液PBS

　　3.β-半乳糖苷酶(β-Gal)

　　常用的底物：

　　1.HRP有邻苯二胺(OPD)，最敏感，显橙黄色，硫酸终止后呈棕黄色、四甲基联苯胺(TMB)，最常用，作用后显蓝色，终止后变为黄色。

　　2.ALP有对-硝基苯磷酸酯(p-NPP)，用NaO H 作为反应终止剂。

　　3.β-Gal有

　　4-甲基伞形酮-β-D半乳糖苷(4MUG)。

　　常用的标记方法：交联法(戊二醛~)和直接法(改良过碘酸钠法)

　　固相载体的选择：塑料制品(聚苯乙烯、聚氯乙烯)、微粒、膜载体

　　2.酶联免疫吸附试验(ELISA)

　　原理：把抗原或抗体结合到某种固相载体表面并保持其免疫活性，即形成固相抗原或抗体;将抗原或抗体与酶连接成酶标记抗原或抗体，它既保留了免疫活性，又保留了酶的活性;在测定时，把受检标本(含待测抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体表面的抗原或抗体起反应形成固相化抗原抗体-酶复合物，用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体-酶复合物与其它成分分离，结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例，加入酶反应的底物后，底物被固相载体上的酶催化生为有色产物，通过定性或定量检测有色产物的量即可确定样品中待测物质的含量。

　　方法类型：ELISA检测抗原的方法主要有：

　　①双抗体夹心法：适用于至少两个抗原决定簇(AD)的Ag。

　　先将特异性抗体与固相载体结合，形成固相抗体，加入待测标本并温育，使标本中的抗原与固相抗体充分反应，形成固相抗体抗原复合物，洗涤去除其他游离成分;然后加入酶标记抗体并温育，使固相抗体抗原复合物与酶标记抗体结合，形成 固相抗体-待测抗原-酶标记抗体 复合物，为“双抗体夹心”;洗涤去除游离酶标记抗体。加入底物，固相载体结合的酶可催化底物成为有色产物，根据产物的显色程度进行抗原的定性或定量检测。

　　临床上常用于乙肝表面抗原HBsAg、甲胎蛋白AFP、人绒毛膜促性腺激素HCG等项目的检测。

　　②双位点一步法：该法是针对抗原分子上两个不同且空间距离较远的抗原决定簇，

　　分别制备两种单克隆抗体，在包被时使用一种单抗，酶标记时使用另一种单抗。测定时将含待测抗原标本和酶标记抗体同时加入反应体系，两种抗体分别与不同的抗原决定簇结合，只进行一次温育，在洗涤后即可加底物进行显色反应。担当待测抗原浓度过高时，可出现钩状效应，甚至出现假阴性结果，必要时可将标本适当稀释后重新测定。)

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