微生物实习报告（精选7篇）

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微生物实习报告（精选7篇）

　　转眼间一个辛苦的实习生活又结束了，这次实习让你有什么心得呢？是时候写一篇实习报告好好总结一下了。那么好的实习报告是什么样的呢？下面是小编精心整理的微生物实习报告，欢迎大家分享。

微生物实习报告（精选7篇）

　　微生物实习报告 1

　　一、实习目的意义

　　1、通过实习过程掌握酸奶中乳酸细菌的分离纯化；

　　2、土壤中自生固N菌分离、纯化、生长曲线测定：通过实习过程，掌握土壤中微生物的分离、纯化和生长曲线测定的技术；

　　3、参观临安青山污水处理厂：参观污水处理厂，了解其运行模式，以及在污水处理过程中微生物发挥的作用和技术；

　　4、参观富阳海正药业有限公司：了解一个大公司大企业的运行情况，以及专业方面的一些技术和应用。

　　二、实习地概况

　　1、第一个和第二个实验是在学校学六实验室完成的；

　　2、第三个实验：临安市青山污水处理有限公司成立于20xx年3月21日，于20xx年5月1日投入试运行，是一个集污水收集、处理于一体的公益事业企业。公司坐落于浙江省临安市青山湖街道研口村发达畈，占地66亩，近期投资8082万元，建成处理能力2万吨/日，收集管网42公里，工艺采用MSBR法，具有脱氨除磷功能的污水处理设施。公司坚持内抓管理强素质，外创先进塑形象，通过规范化、制度化、精细化、科学化的管理来不断提高污水处理水平，努力提升科学管理层次，切实增强企业核心竞争力。公司设备、工艺先进，技术力量雄厚，现有职工21人，其中技术人员15人。公司先后通过了ISO9000和ISO14000质量环境管理体系认证及清洁生产认证。同时被评为浙江省公众满意单位杭州市环境保护模范企业、临安市花园式工厂、临安市安全声场先进单位、临安市卫生先进单位、临安市绿色企业等荣誉称号。

　　3、第四个实验：占地16000平方米，累计投资超过2.6亿元，设有60多个单元实验室，集小试、中试与研发支持为一体。始创于1956年的浙江海正药业股份有限公司秉承“执著药物创新，成就健康梦想”的使命和“成为广受尊重的全球化制药企业”的愿景，致力于整合药物研发与生产资源，为全球客户提供更好的产品和服务，通过美国FDA、欧盟EDQM、澳大利亚TGA、韩国KFDA等官方认证的品种达到40多个，销往全球30多个国家和地区。

　　20xx年，公司荣获“全国五一劳动奖状”，海正、HISUN及图形被认定为“中国驰名商标”，入选“中国万种微生物基因组计划”和“国家重大（磅）级药物品种产业化技术创新联盟”。因圆满完成“抗甲流药物中间体生产”的国家任务，受到省政府的通令嘉奖。

　　20xx年，公司入选浙江省医药工业“十强企业”，并荣获“国内最佳产品线十佳工业企业” 称号，同时被誉为“金蜜蜂奖成长型企业”。我们主要参观了海正药业在富阳的分公司。

　　三、材料方法

　　1、材料：乳酸细菌培养基、酸奶

　　原理：当乳酸菌生长代谢出乳酸后，会是PH下降而使颜色由绿变为黄绿，也由于PH值降低，再加上抗生素及厌氧培养的作用，所以一般的微生物不容易在此培养基上生长。因此十分容易鉴别乳酸菌。

　　方法：1.1 (6月7日)配备乳酸细菌培养基(蛋白胨10.0G,牛肉膏10.0G,酵母膏5.0G,柠檬酸氢二铵2.0G,葡萄糖20.0G,吐温80 1.0ML,乙酸钠5.0G,磷酸氢二钾2.0G,硫酸镁0.58G,硫酸锰0.25G,琼脂18.0G,蒸馏水1000ML,PH 6.2—6.6)

　　1.2 (6月7日)培养基灭菌

　　1.3 (6月8日)用灭菌后冷却至50摄示度左右的培养基到成平板

　　1.4 (6月8日)用灭菌过的接种环挑取酸奶在平板上划线纯化培养4天左右

　　1.5 (6月12日)挑取平板上菌落制成临时装片观察

　　2、材料：阿须贝无氮培养基、土壤

　　方法：2.1 (6月12日)配备阿须贝无氮培养基(葡萄糖10.0G, 磷酸氢二钾0.2G, 硫酸镁0.2G,氯化钠0.2G,CaSO4’2H2O;0.1G,碳酸钙5G,琼脂18G,蒸馏1000ML,PH7.2) 阿须贝无氮培养液(葡萄糖10.0G, 磷酸氢二钾0.2G, 硫酸镁0.2G,氯化钠0.2G,CaSO4’2H2O;0.1G,碳酸钙5G,蒸馏水1000ML,PH7.2)

　　2.2 (6月12日)培养基,培养液灭菌

　　2.3 (6月12日)用灭菌后冷却至50摄示度左右的阿须贝无氮培养基到成平板

　　2.4 (6月12日)用灭菌过的镊子将黄豆大小的菜园土埋入已冷凝的平板培养基上

　　2.5 (6月12日)正面放置28度培养4天

　　2.6 (6月18日)用灭菌过的接种环挑取菌苔在新的阿须贝平板上划线纯化32度培养

　　2.7 (6月20日)单菌落接入液体培养基中于12.24.36.48H后测吸光值.制备生长曲线

　　四、结果分析

　　平板上有一个个单菌落.在显微镜下观察单菌落就只有一种乳酸菌。酸奶中有保加利亚乳菌与嗜热链球菌二种。

　　五、实习感受

　　通过此次实习，我学到了很多课堂上学不到的东西：亲自动手配培养基，分离、纯化菌类，学会使用分光光度计制作生长曲线，同时参观了一些与微生物紧密相连的公司，了解其运行模式、实践技术和应用。这让我清楚地感到了自己肩上的重任，看清了自己的人生方向，也让我认识到了科研工作应支持仔细认真的工作态度，要有一种平和的心态和不耻下问的精神，不管遇到什么事都要去思考，多听别人的建议，不要太过急燥，要对自己所做的事去负责，不要轻易地去承诺，承诺了就要努力去兑现。实习也培养了我的实际动手能力，增加了实际的操作经验，对实际的科研工作的有了一个新的开始，更好地为我们今后的工作积累经验。

　　我知道科研工作是一项需要热情的事业，并且要持之以恒的精神和吃苦耐劳的品质。我觉得重要的是在这段实习期间里，我第一次真正地接触了实验，在实践中了解了一些科研技术，并且在此期间，我参观了一些公司，也与社会有所接触。利用这次难得的机会，也打开了视野，增长了见识，为我们以后进一步走向社会打下坚实的基础。

　　实习期间，我从末出现无故缺勤。我认真听取老师的指导，对于别人提出的实验建议虚心听取，并能够仔细观察、切身体验、独立思考、综合分析，并努力把学到的知道应用到实际实验操作中去，尽力做到理论和实际相结合的最佳状态，培养了我的`耐心和素质。

　　为期两个多星期的实习结束了，我在两个多星期的实习中学到了很多在课堂上根本就学不到的知识，受益匪浅。回想自己在这期间的实习情况，也有不足之处。对此我思考过，学习经验自然是一个因素，然而更重要的是心态的转变没有做到位，有些实验步骤还是停留在应付的层面上。现在发现了这个不足之处，应该还算是及时吧，因为我明白了何谓工作何谓实际。在接下来的日子里，我会朝这个方向努力，在实验操作方面我会更加谨慎。

　　本次实习是我第一次亲身感受了所学知识与实际的应用，理论与实际的相结合，让我们大开眼界，也算是对以前所学知识的一个初审吧!这次实习对于我们以后学习、找工作也真是受益匪浅。我会把这此实习作为我人生的起点，在以后的工作学习中不断要求自己，完善自己，让自己做的更好。

　　微生物实习报告 2

　　1、目的

　　通过实习使学生将理性知识与感性认识有机地结合，将书本知识用于实验，在实验中更深地理解基础理论，提高学生的综合能力与创新意识。通过实习，掌握培养基的配制、分装及灭菌方法；掌握微生物的接种技术；掌握微生物的冷冻干燥保藏方法。

　　2、要求

　　（1）注重微生物学基础实验技能的掌握与提高，克服盲目追求新颖而忽视基础的倾向；

　　（2）课程实习前要预习，明确每次实验的目的与基本步骤；

　　（3）在实验中要有严紧的科学态度，尊重事实与实验结果，要善于发现新现象；

　　（4）树立密切合作的风气，包括学生与老师、班与班、组与组、组长与组员之间的密切配合。

　　二、实习内容

　　1、培养基的配制和灭菌。

　　2、微生物（金葡菌）的接种。

　　3、菌种的（金葡菌）的冷冻干燥保藏方法。

　　4、日程安排：

　　第一天实习课程的讲授；实习工具、仪器和设备的准备（包括培养基的配制、倒平板、金葡菌的活化、保护剂的配制）。

　　第二天金葡菌由固体培养基转接至液体培养基；准备第三天的实验器具。第三天菌种冻干前的预处理。第四天菌种的`冻干操作。第五天冻干机关机，菌种保藏。

　　三、主要材料和仪器设备

　　天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、分装架、移液枪、培养皿、玻璃棒、烧杯、试管架、剪刀、酒精灯、硅胶塞、线绳、报

　　纸、乳胶管、电炉、高压灭菌锅、干燥箱、牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、金葡菌斜面培养物、接种环、冻干机、西林瓶、离心机、生化培养箱等。

　　四、操作方法

　　1.制备培养基

　　2.配制保护剂：鲜牛奶3000r/min离心30min，弃去上层脂肪，加9倍体积生理盐水，分装，121℃(或116℃)高压灭菌20min后备用。保护剂的作用可能是在冷冻干燥的脱水过程中代替结合水而稳定细胞成分(细胞膜)的构型，防止细胞膜因为冻结而破坏。保护剂还可以起支持作用，使微生物疏松地固定在上面。

　　3.包2根离心管、4根大枪头、2个西林瓶、1根8ml生理盐水、1根保护剂，121℃灭菌20min。

　　4.把菌种从平板培养物接种至平板培养基（菌种的活化）：

　　（1）把接种环放在酒精灯上消毒，消毒时应使接种环完全烧红；

　　（2）待接种环冷却后，用接种环从平板上沾取少许菌苔；

　　（3）然后用接种环在平板培养基上画线；

　　（4）把平板培养基拿去37℃培养24h

　　5.把菌种从平板培养物接种至液体培养基（液体接种法）：

　　（1）用接种环从平板上沾取少许菌苔；

　　（2）在管内靠近液面试管壁上将菌苔轻轻研磨并轻轻振荡，或将接种环在液体内振摇几次；

　　（3）将液体肉汤培养基150r/min摇床37℃培养24h。

　　接种液体培养物时应特别注意勿使菌液溅在工作台上或其他器皿上，以免造成污染。如有溅污，可用酒精棉球灼烧灭菌后，再用消毒液擦净。凡吸过菌液的吸管或滴管，应立即放入盛有消毒液的容器内。

　　6.把灭菌物品烘干备用

　　7.拿出液体培养基：取出5ml菌液放入无菌离心管4000r/min离心20min，倾去上清液，再用5ml无菌生理盐水将菌泥重新悬浮，再次4000r/min离心20min，倾去上清液，用5ml灭菌保护剂将菌泥重新悬浮，之后就可以分装入西林瓶，每瓶1ml(液面高度3～5mm)。

　　8.预冻：分装好的菌种管放－80℃预冻2h，同时开启冻干机的制冷机，也可在冻干机的冷阱中预冻菌种。

　　9.冻干：当冻干机冷阱温度达到－40℃时，将预冻好的西林瓶放进压盖干燥架中，把假盖板放在冷阱上，再将干燥架放在冷阱上方，罩上压盖有机玻璃罩，罩下端要与“O”型密封圈完全接触。顺时针拧紧真空阀，按“真空计”键，显示真空度为100～110×103，再按“真空泵”键，真空泵工作（真空泵的盖子要打开），15Pa以下为正常，冻干开始。

　　10.压盖：24h后，视感物料已完全干燥，按顺时针方向转动有机玻璃罩上方手柄，使罩中压盖架丝杠转动下移，将瓶盖压入瓶中，实现在真空中压盖。

　　11.关机：按逆时针方向打开真空阀充气，按“真空泵”键，真空泵停止运转。取下有机玻璃罩，拿出西林瓶保存。

　　五、注意事项

　　需灭菌的物品应严格灭菌，避免污染杂菌；

　　2.接种时应该要等接种环完全冷却后再接种；

　　3.冻干时，西林瓶的盖子一定要放好，即使西林瓶中的空气可以出来形成真空，又能在压盖的时候可以把盖子盖好。

　　六、实习结果

　　上图中盖子已经掉了的和西林瓶中还是液体的都是实验失败的，盖子即没掉瓶子中的菌种又是粉末状的为实验成功的。

　　盖子掉了的：是因为抽气时，气流流动使瓶子掉下来。

　　瓶子中还是液体的：是因为盖子盖的太紧，瓶中的空气抽不出来，水分也没抽出，导致瓶子中的菌种未变成粉末状。

　　七、实习总结或体会

　　通过这个实习，掌握了培养基的配制、分装及灭菌方法；掌握了微生物的接种技术；掌握了微生物的冷冻干燥保藏方法。通过实习将理性知识与感性认识有机地结合，将书本知识用于实验，在实验中更深地理解基础理论，明白了需灭菌的物品应严格灭菌，避免污染杂。也让我的综合能力与创新意识得到了提高。

　　微生物实习报告 3

　　一、实习时间：

　　20xx.6.7-6.12

　　二、实习地点：

　　食品发酵实验室（化学楼119、123）、食品学院实习基地

　　三、实习目的：

　　1、学习自制酸奶的方法，熟悉从酸奶中分离和纯化乳酸菌的一般方法。

　　2、掌握各类酸奶生产的基本工艺和要求。

　　3、学习奶酒的发酵过程、工艺流程，及其注意事项。

　　4、对自己所学的科学知识进一步深化，提高实践能力，整体策划部署能力，动手能力，组织能力，团体协作能力，创新能力等方面也有一些提高。

　　四、实习内容：

　　1.酵母菌筛选方案的确定

　　为了获得最佳酵母菌发酵结果，我们通过对Internet资源以及图书资料的搜索和查寻，查的产酯酵母广泛应用于白酒、黄酒、普通酒、醋、酱油中，另外，还应用于果汁中。

　　所以我们准备了三种菌种来源材料：果皮、酒曲、保藏的酵母斜面。第一种方法是利用果皮做来源，将削下的果皮放入带玻璃珠的三角瓶充分振摇，梯度稀释，涂布于YPD琼脂培养基上。第二种方法是用各种酒曲做为菌种来源，将酒曲粉碎，称量，梯度稀释，而后涂布于YPD琼脂培养基上。第三种方法是利用保藏的酵母斜面作为菌种来源，用接种环在酵母斜面上取一环菌，而后用划线法接种于YPD琼脂平板上，带用于实验。

　　经过大家的讨论后，一致决定利用酵母斜面上的菌种，对其进行培养。因为利用酵母斜面上的菌种在此次实习中可以用到我们实验上所学习的知识，真正将知识用于实践，并在实践中得到巩固。但是，酵母斜面上的酵母菌制得的菌悬液浓度很大，所以在菌种筛选方面，我们将菌悬液10进制稀释到10-5,10-6,10-7的数量级，各浓度涂布两个平板，另六个平板用于划线分离法进行菌种分离，30度培养24到48h，观察平板上的菌落生长情况。初选出酵母菌，将菌落照片后就进行显微镜观察，筛选到典型的酵母菌株，进行生化实验。将平板上的酵母单菌落接种保藏于斜面培养基（PDA）,30度培养48h后，4度冷藏。将PDA斜面培养基上保存的酵母菌接种于培养液中培养，而后接种于豆芽汁发酵液中，进行发酵测产脂能力。

　　2.酵母菌的筛选及鉴定

　　11月25日我们按照讨论决定的方案进行了酵母菌的筛选实验，实验内容如下：

　　2.1培养基的制备、分装、灭菌（分述在下文中）

　　在实习中共需要准备六种培养基：YPD培养基、PDA培养基、豆芽汁培养基、葡萄糖产酸产气培养基、硝酸盐生化实验培养基、糖发酵实验培养基。各培养基配方如下：

　　1、YPD培养基：1%酵母膏，2%蛋白胨，2%葡萄糖，2%琼脂。

　　2、PDA培养基：2%马铃薯，2%葡萄糖，22%琼脂。秤取切成小块的马铃薯，加水煮烂（20-30min），八层纱布过滤，滤液中加入葡萄糖，最后加入琼脂。

　　3、豆芽汁培养基：10%黄豆芽，2%葡萄糖，2%琼脂。洗净豆芽，加水煮沸30min.用纱布过滤。滤液加入琼脂，加热溶解后放入糖，搅拌使它溶解，补水至设定值。

　　4、糖产酸产气培养基：营养物（0.5%牛肉膏，1%蛋白胨，0.3%氯化钠，0.2%磷酸氢钠，0.2%溴麝香草酚蓝）配方为20g/1000ml，蒸馏水配制，pH7.4。分装后加葡萄糖0.5%。

　　5、硝酸盐生化实验培养基：0.3%牛肉浸膏，0.5%-1%蛋白胨，pH7.0（100ml培养基加入1g硝酸钾）

　　6、糖发酵实验培养基：营养物（0.5%牛肉膏，1%蛋白胨，0.3%氯化钠，0.2%磷酸氢钠，0.2%溴麝香草酚蓝）配方为20g/1000ml，蒸馏水配制，pH7.4。分装后加乳糖0.5%。

　　制备：由于第6种培养基同第4种培养基，则一组配制即可，再加上无菌水，共需制备六种，则将全班分成六个组，我们为第4组，故配制过程如下：

　　（1）天平调平。

　　（2）准确秤取7.8g营养物（配390ml），葡萄糖、蔗糖、乳糖各0.65g。

　　（3）将营养物放入搪瓷缸中，加入390ml蒸馏水，玻璃棒搅拌将其溶解。

　　（4）pH试纸测其pH是否为7.4，若不是，用氢氧化钠溶液调到7.4。

　　分装：

　　（1）取三个250ml锥形瓶，每个锥形瓶中倒入130ml的上述溶液。

　　（2）将上述称好的葡萄糖、蔗糖、乳糖分别倒入三个锥形瓶中，摇晃锥形瓶使其溶解。

　　（3）将加入糖的营养液分别装入12个试管中，每个试管用移液管放入10ml。

　　（4）将每两个葡萄糖、蔗糖、乳糖用牛皮纸扎成一捆，即每6个试管扎成一捆，写上班级、组别后待灭菌。

　　灭菌：将已经包扎好的试管放入灭菌箱中，进行灭菌待用。

　　以上就是我们组的制备过程，在这个过程中应该注意以下几点：

　　1、称量前天平要调平。

　　2、秤取营养物时应准确秤取。

　　3、溶解后注意调pH值到7.4

　　4、量取培养液时要准确，特别是向试管中分装时要用移液管。

　　2.2酵母菌的分离（详述分离方法，培养条件及观察到的菌落结果）

　　步骤过程：

　　1、倒平板：待YPD培养基冷却至50度左右后，按无菌操作法倒12只平板（每皿约倒15ml），平置，待凝。

　　2、酵母菌稀释：取1mL菌悬液放入装有99ml的无菌水锥形瓶中，摇匀后再从锥形瓶中取1mL放入1号管，依次进行，则管里酵母的浓度依次是10-2~10-7。

　　3、平板分离：依次从10-7，10-6，10-5的.管里取稀释液进行涂布平板，YPD平板每个浓度涂两个。

　　4、划线法分离：用接种环从酵母斜面上取一环酵母，在酒精灯前按无菌操作法进行划线，将酵母接种于6个平板中。

　　5、恒温培养：将12个培养皿平板置于30℃恒温箱中培养24~48小时。

　　结果：

　　观察菌落：出现了4种不同形态的菌落。

　　①圆形，菌落大，表面光滑，湿润，突起，乳白色。

　　②圆形，菌落略小，湿润，突起，质地均匀，呈乳白色。

　　③椭圆形，菌落略小，湿润，突起，颜色均一，呈乳白色。

　　④椭圆形，菌落大，湿润，突起，颜色均一，呈乳白色。

　　结果分析：

　　通过网上查阅资料显示，正常条件下大多数酵母菌的菌落特征与细菌相似，但比细菌菌落大而厚，菌落表面光滑、湿润、粘稠，容易挑起，菌落质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一，菌落多为乳白色，少数为红色，个别为黑色。啤酒酵母的菌落红酵母的菌落各种酵母菌的菌落。

　　将我们观察的结果与资料相比，确实符合大多数酵母菌的菌落形态。

　　结论：观察到的是酵母菌落。

　　2.3酵母菌的初步鉴定（包括革兰氏染色和糖代谢实验）

　　2.3.1将平板上分离到的各菌株进行简单染色后进行镜检

　　观察结果为：

　　球菌，各个细胞的形状比较规整。

　　结论：

　　通过菌体个体形态和菌落形态，初步确定出了一株酵母菌。

　　注意事项：

　　1、搬动显微镜时应一手握住镜臂，另一手托住底座，镜身保持直立，并紧靠身体，步态稳健。切记单手拎提，以免目镜头从镜筒上掉出而砸坏。

　　2、各个镜面切忌用手涂抹，以免手上的油、汗污染镜面，造成发霉、腐蚀。

　　2.3.2将初步确定的菌株进行生化实验

　　步骤过程：

　　用接种环从平板上挑取已分离的同一菌落接种于糖发酵管和硝酸盐生化管中，接种完后30℃培养。24小时后观察结果。

　　与此同时，将平板上的酵母单菌落接种保藏于斜面培养基（PDA），30度培养48小时后，4度冷藏，待检其他特性。

　　结果：

　　验中并没有观察到，但硝酸盐管中变黄，则分析结果，可能是酵母菌生长不旺盛，导致即使产气也看不出来。

　　根据这一现象，能够说明该菌株具有产酸产气性能，确定此菌株确实是酵母菌。

　　3、发酵产酯实验（11.23-11.24）

　　步骤过程：

　　（1）准确吸取25ml发酵液于250ml锥形瓶中，加入25ml蒸馏水，滴2滴酚酞指示剂，用0.1mol/L的氢氧化钠滴至微红色，记下消耗氢氧化钠溶液的体积。

　　（2）将滴定后的发酵液转移至250ml锥形瓶中，准确加入15ml上述氢氧化钠标液，接上冷凝管，加热至沸回流30min。

　　（3）取下冷却至室温，完全转移至250ml碘量瓶中立即用0.1mol/L的盐酸溶液滴定至微红色刚好消失，纪录盐酸溶液的用量，记录总酯的含量。结果：

　　氢氧化钠消耗体积：V1=1.9ml

　　盐酸消耗体积：V2>15ml

　　分析与结论：氢氧化钠消耗体积1.9ml用来预估总酯含量，且其越大则总酯越少。由此可见，产酯量应该不少。

　　按公式：总酯=（15-V2）X0.1X10-3mol但是我们滴到18ml仍不见结果，并且没有要到微红的迹象。可能是由于配制实验试剂时出现问题，导致没有测出总酯量。

　　五、总结

　　短短一周的微生物实习在紧张又有效率的节奏下顺利的结束了。这是我们自己在老师协助下并亲自动手连续完成的一些列实验，在其中感受到了很多平时和课上很少遇到的东西，有自主，有探索，有反思，有合作。

　　短暂的实习转眼而过，回顾实习生活，我在实习的过程中，既有收获的喜悦，也有一些遗憾。喜悦是我们都在老师的指导下自主设计了方案并分工鲜明，合理掌握每一步实验用时及时、准确测量数据，最终都得到了相应的结果。而遗憾那就是对实验有些方面的认识仅仅停留在表面，只是在看人做，听人讲如何做，未能够亲身感受、具体处理一些工作，所以未能领会其精髓。但时通过实习，加深了我对实验和微生物基本知识的理解，丰富了我的微生物实验的知识，使我对实验有了深层次的感性和理性认识。认识到要做好实验，既要注重理论知识的学习，更重要的是要把实践与理论两者紧密相结合。更进一步体会到了“实践是最好的老师”的深刻意义。

　　微生物实习报告 4

　　一．实习目的

　　1. 了解牛栏山酒厂的历史和酒文化

　　2. 通过参观了解白酒的制作工艺流程

　　二．实习地点

　　北京市顺义区牛栏山酒厂

　　三．相关企业介绍

　　牛栏山酒厂，中国历史悠久的酿酒厂之一。依据现保存在顺义档案馆的《顺义县志》记载，从有详细酿酒历史记载的康熙五十八年（1719）年算起，酿酒古镇牛栏山的“酒龄”已近300年。据民国20年《顺义县志·实业志》载：“牛栏山镇造酒工作是工者约百余人（受雇于治内十一家烧锅），所酿之酒甘冽异常为北平特产，销售邻县或平市，颇脍炙人口，而尤以牛栏山之酒为最著”。

　　牛栏山酒厂自1952年在“公利号”、“富顺成”、“魁胜号”、“义信号”四家老烧锅的基础上成立建厂，现已发展成为国有大型企业，总资产达5.1亿元，是北京市年产白酒5万吨以上的生产厂家之一。企业现有干部职工1500余人，主要生产以“牛栏山”牌二锅头等共计170余种酒类产品，产品深受消费者青眯。

　　四．牛栏山二锅头基本概述

　　牛栏山二锅头，二锅头之宗。二锅头作为京酒的代表，已有八百多年的历史。京师酿酒师蒸酒时，去第一锅“酒头”，弃第三锅“酒尾”，“掐头去尾取中段”，唯取第二锅之贵酿。牛栏山二锅头，宗气一脉相传，于20xx年9月4日荣获“国家二锅头原产地认证”。

　　二锅头酒选用高粱为主要原料，还是以麸曲和酵母为糖化发酵剂，采用传统的“老五甑”工艺，经原料清蒸、辅料清蒸，低温入池，适当发醇，火蒸馏，掐头去尾，贮陈精酿而成。

　　由于二锅头酒的酒液清亮透明，香气芬芳，酒质醇厚，入口甘润、爽洌，酒力强劲，后劲绵长，回味悠长，因此备受广大消费者的认可，二锅头品牌家族也日渐丰富。

　　牛栏山二锅头的发酵，仍沿用古老的.“地缸”发酵法，恪守传统的“清蒸清烧”酿造工艺。从润料、糊化到入池发酵，十多道传统工艺，下足精致工夫。充分保证，地道二锅头之清、香、爽、净。

　　五．生产原料和设备

　　主料：高粱（东北高粱）、玉米、大麦、水（深层地下水）

　　辅料：豌豆、酒曲

　　设备：主要有发酵设备、酿造设备、蒸馏设备、灌装设备等。

　　六．生产工艺和流程

　　1.生产工艺

　　采用续碴清香型曲酒生产工艺。

　　所谓续碴法是将米碴子(指粉碎后的生原科)蒸料后, 取出酒醅(又称母糟, 指已发酵的固态醅, 将米碴子和酒醅混合后, 在甑桶内同时进行蒸酒和蒸料(这种操作称混烧), 然后加曲继续发酵, 如此反复进行。由于生产过程一直在加入新料及曲, 故称续碴发酵法。

　　2.发酵类型

　　采用的是固态发酵法：其工艺特点是全部酿酒过程的物料流转都在固体状态下进行，发酵容器主要采用地缸、窖池、大木桶等发酵设备，多采用甑桶蒸馏。固态发酵的酒质较好。

　　3. 过程控制

　　①对原料的控制:高粱是二锅头的主要生产原料,酒厂择优于我国高粱主产区的东北地区,专门建立了优质原料供应基地,并对原料采取严格收购、多次检测、达标入库、出库在检测等控制方法，保证所有原料均达工艺要求标准。

　　②对水源控制：酿造二锅头使用的是地下三百米处的优质地下水。按工艺要求。酒厂定期对水质进行化验和检测，进行反渗透处理。使水质达到国家生活饮用水标准，在此基础上，水中的一些无机盐以及电导率等指标也要达到酿酒的要求，才能成为合格的酿酒用水。

　　③对勾调工艺的质量控制：目前酒厂盛原酒的容器是陶坛和不锈钢桶，有效地保证了原酒的长期存放；其勾调用水需经反渗透处理，以保证牛栏山二锅头酒的封为特点和优良品质。

　　七．实地参观照片

　　包装生产线陈年窖藏

　　发酵车间传统蒸馏工具——“天锅”

　　八．实习思考题

　　1.二锅头主要是什么香型？

　　答：清香型

　　2.酒的起源有哪几种有意思的传说？

　　仪狄造酒说

　　相传夏禹时期的仪狄发明了酿酒。

　　史籍中有多处提到仪狄“作酒而美”、“始作酒醪”的记载，似乎仪狄乃制酒之始祖。公元前二世纪史书《《吕氏春秋》》云：仪狄作酒。汉代《战国策》则进一步说明：昔者，帝女令仪狄作酒而美，进之禹，禹饮而甘之，日：‘后世必有饮酒而之国者。遂疏仪狄而绝旨酒（禹乃夏朝帝王）。杜康造酒：关于杜康造酒，历史文献多有记载，如《世本》云：“杜康作酒。少康作秫酒。”张华《博物志》云：“杜康作酒。”顾野王《玉篇》云：“酒，杜康所作。”李瀚《蒙求》云：“杜康造酒，仓颉制字。”朱肱《酒经》云：“酒之作尚矣。仪狄作酒醪，杜康作秫酒。岂以善酿得名，盖抑始于此耶？”《类书纂要》云：“仪狄作。杜康造。” 猿猴造酒：当猿猴采集的花果及谷物，食后剩余而残留或者散落在石岩中，日久由于微生物侵入，遂自然发酵成酒。

　　3. 牛栏山二锅头酒蒸馏时“掐头去尾”的道理？

　　蒸酒时，需将蒸馏而得的酒汽，经第一次放入锡锅内的凉水冷却而流出的“酒头”和经第三次换入锡锅里的凉水冷却而流出的“酒尾”提出做其它处理，因为第一锅和第三锅冷却的酒含有多种低沸点的物质成分，味道较杂，所以酒厂只摘取味道醇厚的经第二次换入锡锅里的凉水冷却而流出的酒，故起名为“二锅头”。

　　微生物实习报告 5

　　一．实习目的

　　为了使学生能够理论联系实际，通过亲自实地解剖感染小鼠，对小鼠的心、肝、脾进行麦康凯琼脂平板划线培养，以柯赫法则为这次实习的主线，达到鉴定出小鼠感染的菌种的目的，熟练运用微生物实验课的所涉及的实验操作和方法，提高实验动手能力，分析实验过程中可能出现的问题，并解决问题。特开设微生物教学实习，掌握基本技能，加深理论部分的理解，能够独立诊断出传染病病菌，获得严谨的科学实验素养。

　　二．实习材料

　　实验动物：一只被感染小鼠，一只健康小鼠

　　实验器械，主要包括：小鼠解剖工具手术剪、镊子、蜡盘、钉子，接种棒、酒精灯、打火机、记号笔、手套、载玻片、枪头、注射器、离心管。

　　实验材料：麦康凯琼脂平板、各种染色液（结晶紫溶液、碘溶液、酒精、沙黄水）、蒸馏水、培养基（普通肉汤培养基、蛋白胨培养基、葡萄糖蛋白胨培养基、固体培养基）、PBS重悬液、生化试验材料（微量发酵管（葡、乳、枸、尿素、麦、甘醇、蔗、硫）、对二甲基氨基苯甲醛、乙醚、甲基红、vp甲乙液）。

　　实验主要仪器：离心机，分光光度器，温箱，摇床，超净工作台

　　三．实习内容

　　以柯赫法则为主线，通过对感染小鼠的剖解采样、分离培养、镜检、扩增培养，然后把得到的纯培养物对健康小鼠进行再次接种以获得被感染小鼠，再次重复以上操作，把获得的纯培养物通过镜检观察和做生化实验来鉴定出感染小鼠的致病菌。

　　四．实习操作进程

　　第一天：实验设计、讨论症状、分离剖解

　　1 实验设计：以小组为单位进行实验设计，明确此次实验主要法则是：柯赫法则。在老师的指导下确定此次实习的主要步骤，讨论实验中可能遇到的问题以及注意事项。

　　2 讨论症状：比较观察健康小鼠与病鼠，可见到病鼠一般呈萎靡状，不活跃。每组领取一只感染小鼠观察症状，体表基本正常。

　　3 分离剖解：先将麦康凯琼脂平板分三区，依次写上肝、脾、心。右手抓起小鼠尾巴，将小鼠摇晕，采用颈椎脱臼法将小鼠处死。将小鼠尸体仰卧固定于蜡盘上，充分露出胸腹部。先用小鼠腹部柔软部用剪刀剪一小口，然后从该小口处往上、往下剪将皮毛剥离，剥离腹膜暴露出肝脏和脾，可观察到有轻微的肝肿胀，颜色变淡。将肝和脾切开一小口，用接种环取样，在麦康凯琼脂平板的相应区域进行划线分离。再打开胸腔观察，可见胸腔有出血现象和凝血块，剪开心包膜，将心脏切一小口，用接种环取样，在麦康凯琼脂平板的相应区域进行划线分离。写上班级组别，日期，置于温箱中培养至第二天早上8点。

　　第二天：挑取单菌落，镜检，扩增培养，重悬，测OD配浓度，小鼠腹腔注射

　　1 挑取单菌落：观察麦康凯琼脂平板上菌落的形态为圆形，边缘整齐，表面光滑，暗红色，圆心处颜色较边缘浅。挑去单个菌落，画上记号准备做后续试验。

　　2 镜检：选取所挑选菌落的一半进行抹片。取干净玻片，滴半滴去离子水，用接种环挑取菌进行抹片、干燥固定、采用格兰染色法染色：草酸铵结晶紫染色1-2’，水洗，革兰氏碘液媒染1-2’，水洗，95%酒精脱色约30’’-1’，水洗，沙黄水溶液复染10 ’ ’-30 ’ ’，水洗。吸干，镜检。观察到该菌被染成红色，是格兰阴性菌。

　　3 扩增培养：选取剩余的菌接种到肉汤培养基中，置于温箱培养9个小时至菌的生长对数期。

　　4 重悬测OD值配浓度：下午5点左右，将培养的菌转入无菌小管中离心，离心后可见菌沉于管底，在超净工作台内操作，去上清液，用枪头吸取PBS液至去了上清液的菌管中，反复吹打使其重悬，然后再次离心，去上清，重悬，通过分光光度计测得OD590的值，配成2x10^7CFU浓度的菌液。

　　5 小鼠腹腔注射：每组挑选一只健康小鼠，在头部或尾部做上记号，用右手抓住鼠尾，将其摇晕，令其前爪抓住铁丝盖上，然后用左手的拇指和食指捏住小鼠头颈部皮肤，并翻转左后使其腹部朝上，将其尾巴夹在左手掌与小指之间，右手把持注射器吸取2mL菌液，在股后侧面插入针头，先刺入皮下，后进入腹腔，注射时阻力，皮肤也无泡隆起。注射完将小鼠放回鼠笼即可。

　　第三天：观察小鼠发病情况

　　小组成员分时间段观察小鼠感染情况，见小鼠濒死的尽快解剖接种分离致病菌。若一整天未见小鼠有异常情况的等第二天解剖

　　第四天：剖解划线培养

　　虽然小鼠未见萎靡，由于预订的感染时间差不多，可以进行解剖接种第一天的操作，

　　可见体表有淤血点，剖开的小鼠肝脏流出大量的血液。其余均同第一天的操作，将麦康凯琼脂平板的上所接的菌置于温箱中培养。

　　第五天：生化鉴定

　　观察到平板上只有一个较小的暗红色菌落，挑取该菌落进行扩增培养9小时至细菌生长的对数期。下午6点观察，培养液依旧是澄清的，很可能没有长菌。为做进一步的验证，进行生化试验。将该菌接入微量发酵管和蛋白胨以及葡萄糖蛋白胨中，培养至第二天看结果。

　　第六天：观察结果，整理报告

　　生化试验无任何反应，说明接的菌为杂菌或污物，整理实验报告并分析失败原因。

　　六．实验结果与分析

　　此次试验失败

　　给小鼠攻毒，未能分离出致病菌，因此也无法鉴定出小鼠被感染的病原菌为何种肠杆菌科

　　试验失败原因可能有：

　　1、接种棒火焰消毒后，等待冷却的时间过短，接种棒接种菌时将菌烫死

　　2、由于小鼠的免疫力强，使得感染小鼠的病原菌被免疫掉了，因此未接种到治病菌

　　3、给小鼠注射的量或浓度还不够未能达到使小鼠感染的目的

　　4、在第一次从小鼠体内分离出来的菌可能不是致病菌，或者麦康凯琼脂平板上培养出来的菌落不止一种，而我们挑选到的某一菌落恰好不是致病菌。

　　5、在进行腹腔注射时，可能没有注射到腹腔，而只注射到皮下，或者其它部位。

　　6、采样时可能由于接种环未完全伸入到心、肝、脾的组织中，或者伸到的组织里恰好没有致病菌

　　7、可能由于小鼠感染的时间过短，还未达到菌生长曲线的高峰期

　　七．思考与总结

　　1 此次试验失败的原因有很多在我看来最有可能的原因有以下几点：

　　（1）小鼠免疫:由于这些小鼠是实验室的小鼠，长期被用来做各种致病菌的实验，使得它们获得一定的免疫，所以虽然注射了足够使小鼠感染发病的剂量，但也被小鼠免疫掉了，而无法从小鼠体内获得病料。

　　（2）病料不够：从学姐那了解到，她们做攻毒实验的'动物，都是将整个组织块磨碎以后，再接到培养基上，而我们做实验是只是用接种棒挑取一点，接种棒上粘到的病料比较少或根本没有，因此培养不出菌。

　　（3）挑取的单菌落未必是致病菌：由于平板上长出可能不止一种菌，因此挑到的单菌落，未必是致病菌。

　　2为什么扩增出来的菌不直接注射小鼠，而要经过离心？

　　因为菌可能会产生毒素，若直接注射可能就无法判断使小鼠发病的到底是毒素作用，还是因为病菌在小鼠体内繁殖感染而造成的。

　　3 肠杆菌科有哪些，特征有哪些？

　　学生自我鉴定：

　　xx年5月16号到21号期间进行了维持一周的微生物实习，在微生物实习期间，我能够做到主动和小组成员交流、合作、解决问题，认真完成实验操作，学会灵活运用自己的专业知识解决问题。

　　通过这段时期的实习，我们对无菌操作有了进一步的理解，掌握了仪器操作的基本技能，巩固了理论部分的知识，也了解到公共卫生意识的重要性。

　　实习不过短短的五天，在这短暂的五天内，我们有过发现时的喜悦，有过解剖小鼠时的紧张，有过培养不出菌时的困惑，但最终我们收获了知识，也收获了友谊，在合作中共同进步，在困难中共同进退，一切的困难便能迎刃而解。

　　这次微生物实习为我们专业的继续拓展提供了宝贵的经验，为动物医学本科专业的我们学习后续课程奠定扎实的基础。

　　微生物实习报告 6

　　大三下学期5月份，我们动物检疫专业的同学开始了为期2个多月的教学实习，在众多辅导老师之中，我有幸跟随我校动物科技学院预防系的赵宇军教授进行学习。实习的地点就在我校动科楼的微生物实验室，以前我们曾在这里上过实验课，所以并不陌生。这次大家来到实验室为自行选择课题进行相关实验操作，我对世界闻名的金黄色葡萄球菌非常感兴趣，在老师的带领下进行了相关食物中该菌的检验。下面我们来回顾这次实验。

　　一、实验原理

　　Petrifilm.RSA.测试薄膜是由二部分组成。第一部分是由黄金色葡萄球菌培养基片，此培养基中含有经修正的Barid-Parker，营养成分加上以冷水可溶解的胶质。第二部分是一种耐热核酸酶（TNase）反应片，含有DNA及甲苯胺兰(ToluidineBlue-O)及四唑指示剂(Tetraeolium)。此指示剂有助于菌落的计数及确定葡萄球菌耐热核酸酶的存在。

　　耐热去氧核糖核酸（deoxyribonulcasDnase）为产毒金葡菌之典型特征，此酶非常耐热，在100℃加热30min，不易丧失活性，在130℃之下，其D值为16.6min，此酶之分子量为16800，等电点PH为9.6,耐热去氧核糖酸与检测血浆凝固酶相似，是一种鉴定金黄色葡萄球菌的方法，在Petrifilm.RSA检测片上，耐热DNA酶反应看起来，呈粉红色环带包围着一个红色或兰色的菌落。

　　Petrifilm.RSA检测片，必须与Peyrifilm耐热核酸酶反应片一起使用，单独使用将不会显示菌落，因为具有辅助计数菌落的指示剂是在反应片上，而不是在Petrifilm.RSA检测片上。

　　Baird-parker+RPFagar，这一培养基中含有丰富的营养成分，其中以氯化锂代替亚碲酸钾，使菌落颜色呈黑色，RPF补充有兔血浆和牛纤维蛋白原，以便检测凝固酶活力，胰酶可以抑制全部或部分围绕凝固酶阳性菌落周围沉淀晕环纤维蛋白的溶解，因此凡存在血浆凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌，将在培养基中呈现有晕环的黑色菌落，即可确认，并作计数。

　　二、实验步骤材料和方法：

　　本次实验采用以下3种试剂：

　　1.美国3M公司提供的Petrifilm.Rapid.S.aureusCountPlate.

　　2.法国生物~梅里埃公司提供的Baird-Parker+RPFagar.

　　3.实验室自配Baird-Park琼脂（英国Oxoid）及新鲜兔血浆。

　　菌种来自美国菌种保存中心（AmericaTyPCultureCollection）。金黄色葡萄球菌共10株菌株，其菌号分别为：

　　ATCC27661ATCC27664ATCC13565ATCC51704

　　ATCC(K)12600ATCC(R)65389ATCC25923ATCC29213ATCC8095ATCC12598

　　非金黄色葡萄球菌菌种5株，其菌号分别为：ATCC51813（大肠杆菌）、ATCC624（无乳链球菌）、ATCC51816（阴沟肠杆菌）、ATCC6051（枯草杆菌）、ATCC49214（肠炎沙门氏菌）、自然食品检样，任意购自市场。本次实验是以同一测试样品经均质并通过无菌生理盐水作10倍递增稀释后取1至2个稀释度同时接种上述三种培养基作平行实验，在取得最终结果后相互进行比对。

　　上述三种培养基的接种方法是按生产商所提供的使用说明进行操作，另外Baird-ParkerAgar培养基是按SN0172-92标准进行操作。

　　A、本次实验共测试已知标准菌种共15株，其中葡萄球菌10株，其他菌种5株（包括大肠杆菌、阴沟肠杆菌、肠炎沙门氏菌、枯草杆菌和无乳链球菌）。

　　B、测试自然食品检样共101只（其中包括肉11只、肉类14只、水产品17只、牛奶25只、蔬菜22只、豆制品12只）。

　　三、实验结果：

　　A、被检菌种10株，金黄色葡萄球菌在三种培养基上都能检出生长情况良好，同一稀释度的菌液，除个别菌株外在3种培养基计数检测结果基本都在一个数量级上，无显著差异。而5株非金黄色葡萄球菌的菌株在三种培养基上全部不能生长。

　　B、自然食品检样共接种101只，每一检样同一稀释浓度分别同时种三种培养基，最终共检出金黄色葡萄球菌45只，占全部检样的44.5％，其中PetrifilmRSA检出阳性结果为42只，占全部阳性检样的93.3％，Baird-Parker＋RPFAgar.检出阳性结果26只，占全部阳性检样的57.7％。Baird-Parker.Agar检出阳性结果32只，占全部阳性检样的71.1％。

　　四、实验讨论

　　1.用15株标准菌在3种培养基中的检测，10株金黄色葡萄球菌以同一浓度接种，结果生长良好，其最终计数基本一致，定位在同一数量级，5株非金黄色葡萄球菌接种上述三种培养基全部不长，说明上述三种培养基对金黄色葡萄球菌选择良好。

　　2.以101只自然样品同一均质稀释液，同时接种三种培养基，从最终结果来看，对金黄色葡萄球菌的阳性检出率为44.5％

　　3.从检测程序来年，Petrifilm.RSA及Baird-Parker＋RPF.Agar.都在样品接种后28~30h观察结果，并不必再做证实试验，而如以Baird-ParkerAgar检测，须在接种后48h观察平板，并挑取可疑菌落转种到营养肉汤中，在经18-24h后做血浆凝固酶或耐热DNA酶试验进行证实，最终计数，前后约须80h。

　　4.从本次试验中观察，使用上述三种培养基对食品中金黄色葡萄球菌含量的直接计数检测，其样品接种液的含量拟控制在100个/ml以内，比较容易分清并计数，如菌量过浓，则将会影响最后的读数，因此对新送的被检样品，如在不了解污染的情况下一般必须要做2个以上的稀释度，同时分别接种，才能获得较为满意的结果。而在Baird-Parker＋RPFAgar及Baird-Parker.Agar接种时必须将1ml样液作三只平板涂布（0.3、0.3、0.4ml）这样就会造成手续繁琐试剂消耗较大，但Baird-Parker.RPF.培养基也可以1ml样液作倾注培养，并作计数。

　　5.在整个测试过程中，我们发现，按使用说明对Petrifilm.RSA.及Barid-Parker＋RPF.Agar，操作规定在接种24h后观察结果，此时往往由于菌落长得经较小，特征瓜不明显，但如果继续放置一夜以后金葡萄菌落特征明显，并可能会经第一天观察数量有所增加，这样可以提高检测结果的可信度。

　　6.由于对上述两种培养基的试用期间我们尚未获得供应商的.报价，故无法测算每一样品的测试成本价格。但可以予计上述两面种快速检测培养基的耗材费用要高于常规经典方法（Baird-ParkerAgar）的费用。

　　7.通过本次实验，我们感到使用美国3M公司生产的Petrifilm.RSAPlate培养基和法国生物－梅利埃公司生产的Baird-ParkerRPF.Agar培养基检测中的金黄色葡萄球菌。可以比目前常规检测方法时间可缩短一半。并可以明显节省大量人力。这完全符合实验室快速检测的要求，尤其是对基层较简陋的实验室条件中，更显其使用方便的优越性。

　　实习总结：

　　通过这次严谨而有序的实验实习，为我们先前在教学中学习到的知识提供了一个实际的操作实施平台，也为今后在这方面检验技术的工作起到了指引作用。在过去的学习中，我们并不了解具体的病原微生物实验室检验技术的具体流程，注意事项等等非常关键和必须的防御手段。通过此次生产实习，使我们对以前所不熟知的问题有了深入的认识，也对目前的情况有所思考和感悟。在我看来，动物检疫人员在我国国民生活中起到了关键作用，民以食为天，没有认真负责的实验检测，将给社会带来巨大的饮食灾难，为此，我感到非常自豪和骄傲。在今后的工作学习中，我将一如既往的认真下去，无愧自己的职责和称号。

　　微生物实习报告 7

　　实习时间：

　　20xx年5月8日至8月13日

　　实习地点：

　　山西农业大学兽医微生物与免疫学实验室指导老师：赵宇军

　　实习内容：

　　时间过的很快，转眼间三年的大学生活就结束了，我们动物检疫专业的同学从五月份开始了为期3个多月的教学实习，在众多辅导老师之中，我有幸跟随我校动物科技学院预防系的赵宇军教授进行学习。实习地点为我校兽医微生物与免疫学实验室。实习内容自行选择。在老师的带领下我进行了大肠杆菌的实验室检测和食物中金黄葡萄球菌的检验。下面我们来回顾这次实验。

　　一、培养基配置

　　我们一般用LB液体培养基来扩大培养大肠杆菌，培养后可在LB固体培养基上划线分离。以下为本实验中培养基配置步骤：

　　1．称量：准确称取各成分。蛋白胨0.5g，酵母提取物0.25g，氯化钠0.5g，加水50ml。配置LB固体培养基时还需加1g琼脂。

　　2．溶化：加热熔化，用蒸馏水定容到50mL。配置LB固体培养基时还需加琼脂，整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。

　　3．调pH：用1mol/LNaOH溶液调节pH至偏碱性。

　　4．灭菌：在两个250ml的三角瓶中分别装入50mlLB液体培养基和50mlLB固体培养基，加上棉塞。将培养皿用牛皮纸包好，放入灭菌锅内，1kg压力灭菌15min。

　　5．倒平板：灭菌后，待固体培养基冷却至60℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。

　　其过程是：

　　①将灭过菌的培养皿放在火焰旁，右手拿装有培养基的三角瓶，左手拔出棉塞；

　　②右手拿三角瓶，使三角瓶的瓶口迅速通过火焰；

　　③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖；

　　④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。

　　二、灭菌和消毒

　　1．无菌技术：

　　①对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；

　　②将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；

　　③为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰旁进行；

　　④避免已灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。

　　2．消毒方法：

　　①日常生活经常用到的是煮沸消毒法；

　　②对一些不耐高温的液体，则使用巴氏消毒法；

　　③对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用紫外线进行物理消毒；

　　④实验操作者的双手使用酒精进行消毒。

　　3．灭菌方法：

　　①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；

　　②培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅；

　　③表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。

　　三、细菌的分离

　　采用划线分离法，其操作步骤是：将培养皿底部用拇指和无名指固定成倾斜状态，在火焰旁将培养皿稍微打开。在此同时，用环状接种针在火焰旁取少许菌悬液，迅速送入培养皿内，在平板培养基的`一边，作第1次平行划线3～5条，转动培养皿约70°角，用烧过冷却的接种针，通过第1次划线部分作第2次平行划线，然后再用同样方法，通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线。划线时，接种针应与平板表面成30°角左右。不要使接种针碰到培养皿边缘，也不要将培养基划破。划线完毕后，盖上皿盖，倒置于恒温箱培养。

　　四、菌落和菌种种类的辨认

　　细菌的菌落表面一般是光滑而湿润的，有黏稠性，多数透明或半透明，但也有细菌的菌落表面是干燥、有褶皱的；放线菌由于有纤细的菌丝并可产生孢子，所以菌落表面是紧密的绒状、坚实多皱，长孢子后就成粉末状，由于菌丝和孢子有多种色素，所以在菌落培养基底部和菌落表面都有不同的颜色，菌落不易用接种环挑动；酵母菌落类似于细菌菌落，表面光滑而湿润，有黏稠性但大多呈乳白色，少数呈红色。

　　金黄色葡萄球菌是一种引起人类和动物化脓感染的重要致病菌，也是造成人类食物中毒的常见致病菌之一。本菌广泛分布于自然界，如空气、土壤、水及其它环境中。在人类和动物的皮肤及外界相通的腔道中，也经常有本菌存在。据报导，在正常人群中的带菌率可达30%~80%，其中皮肤带菌率为8~22%，鼻腔和咽喉部等上呼吸道的带菌率在40~50%以上，因此其可通过各种途径和方式，尤其是经工作人员的手和上呼吸道而污染食品。由于致病金黄葡萄球菌能产生肠毒素，故一旦细菌污染食品，并在合适的温度环境下，细菌可以大量繁殖并产生肠毒素，从而引起消费者食物中毒。

　　我国对金黄色葡萄球菌目前采用的方法是以国家标准GB.4789-10-84及检验检疫系统行业标准SN.0172-92作为依据。整个检测过程获得最终结果须时5天左右，既费时又费力，并造成货物积压，也影响货物的及时出运，并使货主的仓储成本提高，造成较大的经济损失。

　　多年来很多食品微生物实验室都在探索和寻找一些准确性高，并快速的检测方法，最近我们分别从美国3M公司和法国生物梅里埃公司获得两种快速检测致病性金黄色葡萄球菌的培养基，其名称为：

　　①PetrifilmRSA.CountPlate（由美国3M公司研制生产），是一种薄膜型快速检测金黄色葡萄球菌的计数平板。

　　②Baird-parker+RPFAgar.（由法国生物梅里埃公司研制生产的用Baird-Parker琼脂加免血浆纤维蛋白原的金黄色葡萄球菌检测计数平板）。

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