dna的粗提取与鉴定

dna的粗提取与鉴定

实验十一 DNA的粗提取与鉴定

教学目的

1、初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法

2、观察提取出来的DNA物质

实验原理

1、DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。当NaCl的物质的量浓度为0.14mOl/L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。

2、DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。

3、DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。

注意事项

1、步骤3析出含DNA的黏稠物中，蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入，不能一次快速倒入。

2、实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。

实验用具

鸡血细胞液(5～10mL);体积分数为95%的冷酒精，蒸馏水，质量浓度为0.1g/mL的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2mol/L和0.015mol/L的NaCl溶液，二苯胺试剂;烧杯(100mL，1个， 50mL， 500mL，各2个)，漏斗，试管(20mL，2个)，玻璃棒，滴管，量筒(100mL，1个)，纱布，镊子，滤纸，铁架台，铁环，三角架，酒精灯，石棉网，载玻片，试管夹。

课时安排

一课时

课前准备

制备鸡血细胞液，方法是：将质量浓度为0.1g/mL的柠檬酸钠溶液100mL，置于500mL烧怀中，注入新鲜的鸡血(约180mL)，用玻璃棒搅拌，使其充分混合，以免凝血。静置于冰箱内一天，使血细胞自行沉淀。也可以用离心机离心2 min(转速1000转/分)。用吸管吸去上清液。

板书

实验十一 DNA的粗提取与鉴定

实验原理

1、析出溶解在NaC1溶液中的DNA。

2、用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。

3、DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。

方法步骤：

1、提取鸡血细胞的细胞核物质：顺时针方向搅拌，稍快，稍重。 5 min

2、溶解细胞核内的DNA

3、析出含DNA的黏稠物：蒸馏水300mL，逆时针方向搅拌，缓慢

4、过滤：取黏稠物

5、再溶解：顺时针方向搅拌，较慢。3 min

6、过滤：取滤液。

7、提取出含杂质较少的DNA，逆时针方向搅拌，稍慢。5 min

8、DNA的鉴定：沸水浴5min((1)无变化(2)蓝色)

上节课我们通过几个验证性实验，证明了DNA是主要的遗传物质。那么DNA是什么样的物质呢?今天我们就通过实验将它提取出来，进行观察和鉴定。

通过预习，我们知道选用鸡血细胞液作为实验材料。在制备鸡血细胞液时，所用的柠檬酸钠有防止血液凝固的作用。

制备过程中，一定要用刚宰杀的鸡的新鲜血，并且要与抗凝剂充分混合，防止凝血。我们采用静置一天的方法，获得鸡血细胞液。

大家在动手做实验之前先要明确几个需要注意的问题。

1、要严格按照实验指导的方法步骤去操作。

2、实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，使用时玻璃棒不要碰到烧杯底，在不同的步骤中玻璃棒的用法不同，每一步的用法参照黑板上的指导去操作。

3、在DNA的鉴定中，所用的二苯胺是一种有毒性的试剂，大家在使用时注意不要让药液接触到皮肤或身体的其他部位，也不要近距离观察。

下面在实验进行过程中，要思考每一操作步骤要达到什么目的。

在进行步骤1时，利用搅拌的5分钟，做如下提问：

为什么要加蒸馏水?加入蒸馏水后细胞将会怎样?

(让细胞内溶液的浓度大于周围溶液的浓度，细胞会吸水以至胀破)

为什么要用力搅拌?

(可以加速血细胞和细胞核的破裂)

所以下一步骤过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质。

在进行步骤3时，要向全班明确：这一步骤是这个实验成败的关键，注意加蒸馏水的方法和使用玻璃棒的方法，千万不能太快太猛，防止打碎DNA。

观察滤取出来的黏稠物的颜色。

有的同学提取的黏稠物较少，原因可能是在溶解DNA时不充分，也可能是析出黏稠物时搅拌的快了。

将黏稠物再溶解时一定要充分，多搅拌。以免有DNA损失。

加入冷酒精时动作要慢。

当玻璃棒上出现丝状物缠绕时，继续慢慢搅拌。至不再增加时，取出吸干上面的水分。仔细观察丝状物呈什么颜色?(黄色)

这些丝状物要用二苯胺鉴定。使用二苯胺时要注意不要接触到药液。进行沸水浴时，在实验室较为通风的地方集体进行。

利用沸水浴的5 min。

步骤3中加入蒸馏水的目的?与步骤1有什么区别?

(步骤3中加蒸馏水是使NaCl溶液的浓度逐渐降至0.14mol/L，使DNA的黏稠物析出。而步骤1加蒸馏水是为了让细胞吸水胀破)

步骤7为什么要加50mL的冷酒精?

(因为DNA不溶于冷酒精，而其他物质可以溶解在酒精中，使含杂质较少的DNA丝状物可以析出。悬浮于溶液中)

现在大家从水浴锅中拿出试管，比较两个试管中溶液的颜色有什么不同?

(有丝状物的试管变成蓝色，另一试管还是原来颜色)

这一鉴定结果说明什么问题?

(提取出的丝状物是DNA)

那么你看到的丝状物的粗细是不是DNA分子的直径呢?

(不是。DNA分子直径只有2nm。丝状物是多个DNA分子聚在一起形成的)

下面请同学们将实验用具，按原样摆放整齐，实验桌要保持清洁。

今天我们通过实验将DNA提取出来进行了观察和鉴定，那么DNA的化学组成，分子结构和复制是怎样的?我们下节课再继续研究。

【dna的粗提取与鉴定】相关文章：

dna亲子鉴定结果08-03

dna鉴定报告书样本08-03

DNA亲子鉴定怎么做11-27

dna聚合酶的特点及其作用01-26

《DNA是主要的遗传物质》教学设计03-18

胯宽大腿粗的女生穿衣禁忌04-28

土地出粗搭建棚合同09-09

住房公积金提取条件08-02

辞职住房公积金提取条件08-02

上海 住房公积金提取条件08-02